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        新聞資訊

        NuPAGE? 凝膠試劑幫你解開電泳誤區

        誤區:凝膠試劑總是修飾我的蛋白

        事實:Nupage? 凝膠試劑實際上保護了您的蛋白

        更中性pH是關鍵

        tris-甘氨酸凝膠系統的根本缺點是樣品制備過程中的蛋白降解。在使用pH 6.8的tris-甘氨酸樣品緩沖液時,樣品在緩沖液中加熱,因tris-甘氨酸的負溫度系數導致pH值下降。這終導致蛋白水解。

        NuPAGE? 凝膠試劑通過維持較高的樣品緩沖液pH值,保留了蛋白樣品的完整性(圖1)。NuPAGE? 樣品緩沖液的pH值不會低于pH 8(即使是加熱到70°C),因此樣品制備過程中蛋白樣品不會降解。

        NuPAGE? 凝膠試劑幫你解開電泳誤區

        圖1. 看看NuPAGE? 凝膠的與眾不同之處。(A) NuPAGE? 凝膠利用1×MES緩沖液運行。(B) tris-甘氨酸凝膠利用tris-甘氨酸/SDS緩沖液運行。圖片顯示,與tris-甘氨酸凝膠相比,NuPAGE? 凝膠產生銳利、完整的條帶,代表了未水解的蛋白,特別是在第3、5、7、8和9道。

        樣品上樣:(1) Mark12? 未染色標準品,10 μL;(2) 大鼠肝裂解液,10 μg;(3) 溶菌酶,6 μg;(4) Bio-Rad? 寬范圍標準品,1:50稀釋;(5) BSA,6 μg;(6) MagicMark? XP標準品;10 μL;(7)人IgG,6 μg;(8)人IgM,6 μg;(9)大腸桿菌裂解液,10 μg;(10) Novex? Sharp未染色標準品,10 μL。

        誤區:NuPAGE? 凝膠跑得太慢了

        事實:NuPAGE? 凝膠可在250V下跑24分鐘

        標準運行步驟

        為了獲得有效的分離,傳統Laemmli凝膠需要跑90分鐘。相比之下,NuPAGE? 凝膠的標準步驟則為200V,35分鐘。此外,如果使用加速步驟,僅需24分鐘就能獲得有效分離(250V)。

        NuPAGE? 凝膠試劑幫你解開電泳誤區

        圖2. 加快運行時間,而不犧牲性能。NuPAGE? 樣品上樣:(1) Mark12? 未染色標準品,10 μL;(2) 大鼠肝裂解液,10 μg;(3) 溶菌酶,6 μg;(4) Bio-Rad? 寬范圍標準品,1:50稀釋;(5) BSA,6 μg;(6) MagicMark? XP標準品;10 μL;(7)人IgG,6 μg;(8)人IgM,6 μg;(9)大腸桿菌裂解液,10 μg;(10) Novex? Sharp未染色標準品,10 μL。

        誤區:預制膠太貴了

        事實:使用Novex? 預制膠不僅能節約時間和寶貴的樣品,還能節約經費

        30多年來傳統的凝膠分離基本沒變。使用Novex? 預制膠帶來以下明顯優勢:

        ?制備時間更短——遠離自己灌膠的麻煩,您可以更快獲得結果,并進入流程中的下一步

        ?實驗間的一致性更佳——我們的蛋白凝膠經過嚴格的質量控制,能大限度地降低實驗間的差異,幫助您獲得更加準確的結果

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