一、線性的定義
紫外可見分光光度計的線性是指實驗點接近或偏離比耳定律A = f ( C) 直線部分的程度。換言之, 如果給定化合物的兩個濃度的響應值之差正比于兩個被測試樣的濃度差, 且該差值在誤差要求的范圍內, 則可認為紫外可見分光光度計的輸出是線性的。
二、線性對分析測試誤差的影響
紫外可見分光光度計的線性在定量分析工作中有著極其重要的意義。Joh nson、Scot t、Mun k 等人曾多次指出, 如果儀器的線性很差, 就不可能得到好的定量分析結果。作者在實踐中發現, 在給定儀器的情況下( 即儀器的噪聲為“ + ” 值時) , 當被測試樣的濃度小到一定程度時, 實驗結果偏離比耳定律的直線而明顯地向上彎曲, 反之則向下。作者用自制的UV/ FL-1 型紫外/ 熒光分光光度計測試濃度為4. 06×10 - 6 g/ ml 的K2 CrO4 時, 因儀器“ + ”噪聲的影響, 產生的吸光度相對誤差( 正偏差) 達25% , 即真值為0. 0052A實測為0. 0056A。而當濃度增大到2. 01×10 - 3 g/ ml 時, 因雜散光的影響, 實測K2 CrO4 的吸光度誤差達到36% ( 負偏差) 。因此, 在定量分析時, 必須嚴格注意儀器的線性, 否則不能得到好的分析結果。
三、儀器線性的測試方法
在正式使用一臺新的儀器以前, 一般都先對儀器的線性進行測試。但大多數使用者只是在某一試樣的某一濃度附近, 用濃度的倍數變化, 測出這一段的線性。這只能反映儀器在小范圍內的實用情況, 并不能說明儀器的線性是否符合出廠指標, 也不能反映儀器的線性范圍。為了**了解紫外可見分光光度計的線性, 還需按下述方法進行測試。
測試紫外可見分光光度計線性的方法很多, 常用的大致有以下6 種:
1. 溶液稀釋法
溶液稀釋法的具體作法是將鉻酸鉀( K2 CrO4 ) 稀釋到不同濃度, 測量不同波長處的吸光度值(一般需測量85 個吸光度值) , 然后, 根據此數據作曲線, 再根據曲線來判斷紫外可見分光光度計的線性。
2. 中性濾光片法
一般以3 塊中性濾光片疊加, 比較測定值與計算值之差來判斷紫外可見分光光度計的線性。
3. 百分法
百分法是將被測試樣的濃度成倍增加, 測其吸光度, 作曲線, 判斷實驗值偏離比耳定律直線部分的程度。
4. 改變樣品池厚度法
用不同厚度的樣品池來測量鉻酸鉀( K2 CrO4 ) 的吸光度, 以此來判斷紫外可見分光光度計的線性。
5. 旋轉扇形板法
以不同透射率的扇形板在樣品光束中旋轉, 測出各點透射率與真值進行比較; 以此來判斷紫外可見分光光度計的線性。
6. 光疊加法
利用孔規來分段測試, 然后作曲線判斷紫外可見分光光度計的線性。
