聚焦Roche轉染試劑

一提起羅氏的轉染試劑，大家肯定立馬想到Fugene 6/HD。直到有**，羅氏不再出售Fugene了，我們才知道原來它并非羅氏制造的。Fugene是Fugent公司的注冊商標，現在該產品由Promega公司分銷。

即使Fugene 6/HD不在手，羅氏也毫不畏懼，因為它集合二十年的轉染經驗，推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP轉染試劑。X-tremeGENE 9試劑為多種常用的細胞系帶來了高效的性能，而X-tremeGENE HP試劑則更適合于難轉染的細胞，比如原代細胞、昆蟲細胞。這兩款試劑還有一點與Fugene很相似，那就是對細胞溫和。

X-tremeGENE 9 & X-tremeGENE HP

這兩款試劑都綜合了低的細胞毒性和高的轉染效率，讓更多細胞存活，且帶來生理上更相關的結果。而且，轉染步驟也相當簡單：只需用無血清培養基稀釋轉染試劑，與質粒共同孵育，然后逐滴加入細胞中。研究人員所需的優化極少，當然，在轉染之前，你還是得優化轉染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1，但對于特定研究，2:1至7:1的比例可能會提高轉染效率。

此外，X-tremeGENE HP試劑還經過0.2 μm孔徑的膜過濾，無動物來源成分，在血清中也有活性。它與核酸形成復合物，促進高效的DNA轉移，而帶來的生理和形態學改變極少。它非常適合細胞分析和蛋白表達研究。

如何選擇這兩款試劑，請看下表。如果轉染HeLa、HEK-293等普通細胞系，這兩個都能勝任。至于那些難搞定的細胞，則好選擇X-tremeGENE HP試劑。若說到試劑的溫和性，恐怕X-tremeGENE 9試劑要更勝一籌。

X-tremeGENE 9試劑的價格為1764元/0.4 ml、3545元/1 ml，X-tremeGENE HP試劑的價格為2098元/0.4 ml、4851元/1 ml。(價格僅供參考)

使用X-tremeGENE 9/HD的tips

1. X-tremeGENE 9 DNA轉染試劑應儲存在+2至+8°C，X-tremeGENE HP DNA轉染試劑應儲存在-15至-25°C。

2. 使用前，將裝有X-tremeGENE DNA轉染試劑的玻璃瓶放置于+15至+25°C，并漩渦一秒。

3. 請勿分裝X-tremeGENE DNA轉染試劑;將剩余的轉染試劑保存在原裝的玻璃瓶內。

4. 盡量避免未稀釋的X-tremeGENE DNA轉染試劑與塑料表面的接觸。

5. 使用時，X-tremeGENE DNA轉染試劑與DNA復合物的小體積為100μl。減少復合物體積將會顯著降低轉染效率。

6. 請避免使用聚苯乙烯類管子或微孔板進行X-tremeGENE DNA轉染試劑與DNA復合物的制備。若不能避免聚苯乙烯材料，應確使轉染試劑直接加入無血清培養基或Opti-MEM I低血清培養基中。

7. 請勿使用(聚)硅酮處理的吸頭或管子。

8. 確保細胞在轉染時期仍處于指數增長階段。

9. 轉染時，應設計合適的對照，包括：(1)未轉染的細胞;(2)僅加入轉染試劑的細胞;(3)僅加入DNA的細胞。

10. 轉染試劑與DNA的優比例，以及復合物的適總體積，應根據細胞系、細胞密度、檢測時細胞生長狀況和基因表達的不同進行調整。

X-tremeGENE siRNA 轉染試劑

X-tremeGENE siRNA 轉染試劑是一個基于脂質體的、并經過優化的轉染試劑。雖說名字上寫著siRNA，但它也能用于siRNA和表達質粒的共轉染。它能和小干擾 RNA(siRNA)或siRNA/質粒DNA混合物形成復合物，并高效地轉入動物細胞，引發相應的基因沉默。相對較小的細胞內毒性，確保觀測到的細胞效應僅同轉染或共轉染的siRNA相關。有無血清均可進行轉染，轉染后無需進行換液操作。

操作流程：用無血清Opti-MEM分別稀釋X-tremeGENE siRNA 轉染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育15-20分鐘。加入細胞，監控干擾效果。

價格：2816元/1 ml，11981元/5×1 ml(24孔板的每孔建議用量為2.5 μl)(價格僅供參考)

使用X-tremeGENE siRNA的tips

1. 對于初次優化，使用下列量的X-tremeGENE siRNA轉染試劑(μl)和siRNA(μg)：10:2、2.5:0.5、1:0.2。

2. 根據羅氏的經驗，24孔板的每孔使用2.5 μl X-tremeGENE siRNA轉染試劑，可實現大部分細胞類型的高效knockdown。

3. 如果可能，初次實驗時排除**劑。一旦建立了高效的條件，在監控轉染結果時可加回這些組分。X-tremeGENE Reagent:siRNA復合物必須在不含血清的培養基中制備，即使細胞在血清存在時轉染。

細胞特異的轉染步驟

羅氏提供了一些細胞特異的轉染步驟(Cell-type specific protocols)，作為您使用轉染試劑的指引。當然，這些僅供參考。羅氏還有一個轉染數據庫，提供了相關引用文獻的鏈接以及一些客戶反饋。您可以根據細胞名稱搜索相關的轉染步驟，使用下拉菜單，比較方便。網站上例如：在搜索用X-tremeGENE 9轉染試劑轉染293細胞時，網頁上出現如下結果。

293細胞已被7位客戶成功轉染，利用X-tremeGENE 9轉染試劑和質粒DNA。

轉染類型：瞬時

以下比例獲得了佳結果(試劑μl:DNA μg)：3:1;2:1

注意：這些來自客戶反饋的比例僅作為指引，未經過羅氏驗證。佳的轉染條件可能有所差異，須根據經驗確定。