β-Actin介紹及其應用

內參就是內部參照，在生物基因表達檢測中常常用到內參。內參主要用來做參照物校正上樣量。生物試驗中常用管家基因作為內參，因為管家基因在細胞內的組成相對比較穩定，表達也保持一致。常用的內參基因有GAPDH、18sRNA、β-Actin等，下文主要介紹β-Actin的主要特性。

Actin即“肌動蛋白”，是細胞的一種重要骨架蛋白。同時Actin在細胞分泌、吞噬、移動、胞質流動和胞質分離等過程中起重要作用。Actin在不同物種之間高度保守，以至于很難獲得較好的針對actin的抗血清。Actin大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，包括α-skeletal muscle actin，α-cardiac muscle actin，α-smooth muscle actin，和γ-smooth muscle actin; 其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscle actin。不同的actin之間同源性大于90%，但在N-terminal同源性僅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。

β-Actin

β-Actin是橫紋肌肌纖維中的一種主要蛋白質成分，也是肌肉細絲及細胞骨架微絲的主要成分。具有收縮功能，分布廣泛。

β-Actin是PCR常用的內參，β-Actin抗體是western Blot很好的內參指數。內參即是內部參照(Internal Control)，對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。常用的蛋白質內參有細胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此β-Actin抗體、β-Tubulin抗體以及GAPDH抗體成為常見的三個動物細胞內參抗體。

β-Actin作為內參是得到了公認的，這是針對大多數組織和細胞來說的，它廣泛分布于細胞漿內，表達量非常豐富。Beta-actin由375個氨基酸組成，分子量大小為42-43kDa左右。

β-actin的蛋白水平通常不會發生改變，因此被廣泛用于Western時上樣量是否一致的參照，也常被用于**染色觀察細胞的微絲結構。在用作Western的參照時，Actin抗體和Tubulin抗體的主要不同之處在于兩者所識別蛋白的分子量不同，這樣可以選擇合適的參照在同一塊膠同一張膜上實現同時檢測目標蛋白和參照蛋白。
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近些年來研究發現，將管家基因作為內參使用也具有一定的缺陷性，例如在不同類型的細胞、處于不同發育階段的組織或者培養條件不同等情況下，這些管家基因的表達量往往會有較大差異，因此在選擇內參基因時，要根據所研究的實驗情況來選定表達比較穩定的管家基因作為內參。