各種ALEXA FLUOR染料的強大應用剖析

本文的內容圍繞Alexa Fluor染料的優點、Alexa Fluor染料可替代的熒光染料、各種Alexa Fluor 染料的光譜特性，為您展示Alexa Fluor 這一熒光標記試劑明星產品的強大功能和廣泛應用潛力所在。

Alexa Fluor 是熒光標記試劑的一大突破，涵蓋了從近紫外、可見光，到近紅外光譜的一系列熒光染料，其代表了熒光標記試劑發展的一個重大突破，并產生了目前為止我們測試過的，好亮的復合物。作為新一代染料，Alexa Fluor 染料系列及其復合物，能為您解決熒光染色常見問題。

Alexa Fluor 的優點如下：

? 亮度 — Alexa Fluor 偶聯物相比其他染料熒光更強。

? 光穩定性 — Alexa Fluor 偶聯物相比其他染料光穩定性更強，提供更長的圖像捕獲時間。

? 儀器兼容性 — Alexa Fluor 偶聯物的吸收光譜與普通激發光源的主要輸出波長相匹配。

? 多種顏色 — Alexa Fluor 偶聯物有藍色到紅色的多種直接熒光.

? pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一個廣泛的pH 范圍內保持強熒光.

? 水溶性 — Alexa Fluor 反應性染料有良好的水溶性, 無需有機試劑即可結合蛋白, 且儲存不易產生沉淀.

Alexa Fluor 染料的光譜特性:

?Alexa Fluor 350— 亮藍和紫外光激發

Alexa Fluor 350 的藍色熒光比AMCA 亮50%，而且大發射波長稍短(為442nm ，AMCA 為448nm)，因此更容易與現有的綠色熒光基團區分。

? Alexa Fluor 405 —近乎**的匹配藍色二極管激光器

Alexa Fluor 405 的激發/發射**長為402/421 nm，與近來使用的熒光顯微鏡和流式細胞儀405nm譜線的藍色二極管激光器近乎**的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反應性衍生物，后者是乙酰疊氮化物。Alexa Fluor 405琥珀酰酯純度更高且有一個4-**羧酸的間隔，使得熒光基團與其偶聯的生物分子之間的反應性小化。

?Alexa Fluor 430—高斯托克斯頻移的430 nm吸收少數 400nm ~ 450nm 吸收的染料在水溶液中可測熒光偏離500nm。Alexa Fluor 430 彌補了這一缺陷，430nm激發時發射在540nm附近。

?Alexa Fluor 488—好的綠色熒光基團

Alexa Fluor 488 偶聯蛋白優于其他熒光素，實驗證明比包括Cy2 的其他綠色熒光基團都好。不僅亮度更高，而且光穩定性更好。在pH4～10 保持穩定是另一優越之處。

? Alexa Fluor 532 —適于532 nm 激發光源的染料

激發發射波長位于綠色熒光Alexa Fluor 488 和橙色熒光的Alexa Fluor 546 之間，適用于雙頻Nd:YAG激光器在內的532 nm 激發光源。

?Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基羅丹明的替代物

Alexa Fluor 546 標記的偶聯物良好應用于橙色范圍光譜，比四甲基羅丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 熒光更強，容易被汞弧燈激發，發射波長546 nm。

?Alexa Fluor 555—優于Cy3 的替代物

Alexa Fluor 555 與Cy3 偶聯物的光譜相匹配，因此適用于Cy3 的濾光器。Alexa Fluor 555 的總熒光更強，且光穩定性更好，為研究者提供了更長的圖像捕獲時間。

?Alexa Fluor 568 —適于568 nm 激發光源

Alexa Fluor 568 的橙紅色熒光適用于激光共聚焦顯微鏡的Ar–Kr 混合氣體激光器，其發射的譜線為568nm。與具有相似大激發/發射波長的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比， Alexa Fluor 568的偶聯物亮度更高。

? Alexa Fluor 594 —優于Texas Red 的替代品

Alexa Fluor 594 偶聯物發出紅色光，可與綠色熒光探針一同用于多色標記實驗。比Texas Red 偶聯物有更高的亮度。

? Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 好的紅色染料

Alexa Fluor 610 亮度高、光穩定， 可用檢測 Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光學元件檢測。前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受體染料。新的Alexa Fluor 610 激發/發射波長為612/628nm，容易與綠色熒光基團相區分，適用于多色標記。Alexa Fluor 610 仍為人眼可見，優于Alexa Fluor 633和其他更長波長的熒光團。

? Alexa Fluor 633 —光穩定性更強

遠紅光染料近來大受歡迎，是因為它們的光譜范圍在大多數樣品的自發熒光之外。He–Ne 激光器 633 nm 和紅色二極管激光器635 nm 譜線的廣泛應用加速了兼容染料的開發。Alexa Fluor 633 偶聯物具有亮度和光穩定性，吸收峰在632 nm，發射峰在650 nm。

?Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 線的佳染料

新的 Alexa Fluor 635 染料，其偶聯物比Alexa Fluor 633 亮度更高，因為它的吸收光譜不會象Alexa Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那樣分成兩個峰。Alexa Fluor 635 同樣適用于He–Ne 激光器的633 nm譜線和紅色二極管激光器的635 nm 譜線，吸收峰在633 nm，發射峰在647 nm。

? Alexa Fluor 647 —優于Cy5 的替代品

Alexa Fluor 647 與Cy5 偶聯物的光譜及濾光器相匹配。Alexa Fluor 647 二抗偶聯物的總熒光亮度高于其他公司的Cy5 偶聯物。在與大多數的蛋白質、寡核苷酸和核酸結合時，Alexa Fluor 647 相比Cy5 熒光吸收光譜波動很小，因此在同等程度的替換時發出的熒光更強。

? Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物

Alexa Fluor 680 的激發峰在679 nm，大發射為702 nm，與Cy5.5 類似。Alexa Fluor 680 能夠很好的與其他紅色熒光團區分，如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想的三色與四色標記用染料。

?Alexa Fluor 700 —遠紅光二極管激光器的適染料

Alexa Fluor 700 大吸收在696 nm，能夠被675–700 nm 范圍的氙弧燈、遠紅外二極管激光器或dye-pumped lasers 激發。發射光在紅外區，峰值為719 nm。

?Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 長波長的產品

Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列產品中波長長的產品，與Cy7 光譜相似。其發射的**長為779 nm，能夠和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)區分，適合多色分析。Alexa Fluor 700偶聯物 752 nm 的大激發光使其適用于720–750 nm 范圍的氙弧燈或dye-pumped lasers。

成功的實驗都是相似的，不成功的實驗卻各有各的問題所在。每一次的**標記實驗都會或多或少遇到些耽誤進程的問題，希望本篇介紹的Alexa Fluor能夠實實在在幫您減輕實驗中的煩惱。