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        新聞資訊

        GTP酶研究新工具(一)

        GTP酶是一個(gè)水解酶的大家族,它們能夠結(jié)合并水解三磷酸尿苷(GTP)。GTP結(jié)合與水解是在所有GTP酶共有的高度保守G結(jié)構(gòu)域中發(fā)生的。GTP酶在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白生物合成、蛋白轉(zhuǎn)位以及囊泡運(yùn)輸上都扮演了重要角色。

        異三聚體GTP酶通常與g蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)結(jié)合,有著不同的信號(hào)異構(gòu)體,來確定受體信號(hào)。小GTP酶超家族包含數(shù)百個(gè)蛋白,它們可進(jìn)一步細(xì)分成Ras、Rho/Rac、Rab、 Arf和Ran家族。這些單體GTP酶在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)事件中起著分子開關(guān)的作用,這要取決于它們是與GTP結(jié)合,還是與GDP結(jié)合。

        為了研究GTP酶的活性,賽默飛世爾科技公司推出了一系列產(chǎn)品。Thermo Scientific Pierce GTP酶富集試劑盒(Thermo Scientific Pierce GTPase Enrichment Kit)。顧名思義,它可選擇性標(biāo)記并富集小GTP酶和G蛋白大亞基。試劑盒提供的試劑廣泛適用于組織、細(xì)胞以及亞細(xì)胞蛋白質(zhì)組中GTP結(jié)合蛋白的富集。

        Pierce GTP酶富集試劑盒由新型的脫硫生物素-核苷酸探針技術(shù)拓展而來,該技術(shù)也應(yīng)用于Thermo Scientific新近推出的激酶富集試劑盒。核苷酸與脫硫生物素相結(jié)合,后者是由ActivX Biosciences開發(fā)的生物素的類似物。核苷酸與GTP結(jié)合蛋白的活性位點(diǎn)結(jié)合,利用脫硫生物素標(biāo)簽,即可進(jìn)行針對其結(jié)合的蛋白進(jìn)行捕獲和富集。與生物素和蛋白的結(jié)合相比較,脫硫生物素結(jié)合的力量較弱,當(dāng)使用生物素替換、低pH或加熱時(shí),脫硫生物素與被捕獲的蛋白能夠輕松分離。

        若想研究抑制劑結(jié)合親和力和目標(biāo)特異性,可將樣品與小分子抑制劑預(yù)先孵育?;钚晕稽c(diǎn)的標(biāo)記可通過 Western blot或質(zhì)譜來分析(下圖)。對于Western blot流程,脫硫生物素標(biāo)記的蛋白富集后,可開展SDS-PAGE分析,進(jìn)而檢測。對于質(zhì)譜流程,脫硫生物素標(biāo)記的蛋白被還原、烷基化并消化成肽段。兩個(gè)流程都可確定抑制劑目標(biāo)的結(jié)合,但只有質(zhì)譜流程能夠鑒定出整體的抑制劑目標(biāo)和脫靶。

        GTP酶研究新工具(一)

        通過質(zhì)譜流程,研發(fā)人員鑒定出超過500種活性位點(diǎn)肽段,對應(yīng)了G蛋白大亞基和小GTP酶家族的66種不同的GTP酶(下表)。通過這種方法生成的蛋白質(zhì)組目標(biāo)列表可實(shí)現(xiàn)多個(gè)細(xì)胞和組織類型中GTP酶表達(dá)的比較。

        GTP酶研究新工具(一)

        Pierce GTP酶富集試劑盒包括所有的標(biāo)記和富集所需的試劑,包括ActivX GTP探針,足夠16次富集使用。探針也可單獨(dú)購買。

        滬公網(wǎng)安備 31011002002624號(hào)

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