GE healthcare一直是高內涵分析領域的**者。IN Cell Analyzer是市場上多功能的HCA產品之一,在模塊性、完整性和易用性方面尤為突出。它曾獲得2007 Frost & Sullivan技術**獎。
GE healthcare的高內涵分析平臺主要有兩款:IN Cell Analyzer 2000和IN Cell Analyzer 6000。IN Cell Analyzer 2000全自動熒光顯微鏡型細胞高內涵成像分析系統以大功率高亮度長壽命金屬鹵素燈為熒光光源,有著硬件和軟件的獨特組合,能夠非常快速地獲取圖像,是篩選的理想選擇。而新一代的**產品IN Cell Analyzer 6000 激光共聚焦高內涵細胞成像分析系統將高質量激光光源、可變光闌共聚焦和高內涵細胞成像分析相結合,使高速度和高質量細胞圖像獲取和分析達到統一,為客戶提供了快速而精準的細胞技術分析平臺。它可以滿足要求更高的高內涵分析和篩選。
這兩款儀器的成像質量有所不同:IN Cell 2000提供的圖像是寬場熒光顯微鏡質量的圖像,IN Cell 6000提供的是共聚焦顯微鏡質量的圖像;在成像速度上也有區別,IN Cell 2000比IN Cell 6000快。因此,您可以根據對成像質量和成像速度的要求來選擇適合自己的高內涵儀器。
下面我們就從成像速度、成像質量和圖像分析軟件這三個方面對IN Cell平臺進行深入剖析。
IN Cell Analyzer 2000
IN Cell Analyzer 2000可實現從顯微觀察到自動化篩選,以及細胞器、細胞、組織和整個生物體的成像。它有著硬件和軟件的獨特組合,能夠非常快速地獲取圖像,是篩選的理想選擇。該儀器是利用六西格瑪原理來設計的,結構堅固,能確保它在多用戶環境中高通量應用的可靠性。
與普通顯微鏡相比,IN Cell Analyzer 2000的成像速度極大提高。如果每個孔取一個視野,雙色熒光,Hoechst染細胞核,EGFP標記細胞器,硬件自動聚焦,IN Cell 2000可以在約3分鐘內對整塊96孔板成像,在短短幾分鐘內得到將近200張照片。
盡管不是共聚焦高內涵儀器,但IN Cell 2000獨有的去卷積圖像復原功能可以顯著提高圖像的對比度和分辨率,提供可與共聚焦圖像媲美的高質量的圖像。
此外,IN Cell 2000還具有預覽掃描功能。它可在任何放大倍數下對任意區域進行預覽掃描,幫助了解樣品概況,確定感興趣的區域和視野的分布,如果需要,可以對整個微孔板或者整張蓋玻片進行預覽掃描。而96孔板整孔成像功能可幫助您在用高倍物鏡成像前可以快速確定感興趣區域的位置,也不會漏掉偶發事件。干細胞克隆分析、腫瘤學的克隆形成試驗以及斑馬魚胚胎發育研究都需要對96孔板整孔成像,目前只有IN Cell系列儀器提供此功能。
IN Cell Analyzer 6000
若您既希望成像速度快,又希望圖像質量好,那么IN Cell 6000則是不二之選。它是以激光為光源的可變光闌線掃描共聚焦高內涵儀器,擁有**的光學系統,成像完全可調:光闌完全打開時成像速度快,完全共聚焦模式去除背景有效,光闌打開的程度在1-3 AU之間可調。您可以針對不同的需求調節共聚焦程度,在圖像質量和成像速度之間找到適合自己的平衡。
IN Cell 6000將全自動成像推廣到一些很難進行高通量檢測的樣品和實驗。過去一些通常由低通量共聚焦技術完成的實驗,如3D結構成像、低豐度內源生物分子成像、蛋白共定位等,現在可由IN Cell Analyzer 6000實現高通量檢測。
IN Cell 6000的可變光闌線掃描共聚焦是一種新的共聚焦方法,是GE的**技術,既顯著提高了成像速度,pinhole的大小又是可調的,因而適用于全系列物鏡,即使用10X物鏡成像時也可以達到很好的去除雜信號的效果。
另外,IN Cell 6000感光成像采用550萬像素新一代sCMOS相機,噪音比CCD相機低五倍,超高靈敏度并縮短曝光時間,比標準相機的視野大四倍。
軟件也不容忽視
IN Cell Investigator數據分析軟件包含三個級別的分析工具:預設常規分析工具、MTA 導向式多目標分析工具、Developer 自主定義分析工具。這三級工具使用同樣的圖形用戶界面(GUI)和分析流程,方便從簡單分析到復雜分析的轉換。預設的常規分析有九種:質膜轉位分析、核質轉位分析、神經突生長分析、顆粒形成分析、目標熒光強度分析、細胞周期分析、雙重區域目標分析、形態學分析、微核分析。
Developer Toolbox曾獲得2006年全球佳生物圖像分析軟件獎(美國知名科學雜志《Scientific Computing》頒發)。針對特定的實驗,用戶使用一系列的圖像分析工具來編寫自己的分析程序,包括:**區分(segmentation)工具,圖像處理工具,自定義測量值,宏子程序等。
IN Cell Investigator 還內嵌和Spotfire DecisionSite 軟件連接的圖標,輕松使用數據可視化分析工具:Spotfire是一款用于科學數據分析的可視化分析平臺,其大的特點是通過多種動態的圖形(點圖、線圖、柱狀圖、餅狀圖、熱圖等)和篩選條件,快速對大量的數據進行分析和處理,并可以做出報告或與他人分享結果,做出決策。支持多種客戶端界面和Web界面的訪問和顯示。
IN Cell信息量豐富,數據量大,可以用IN Cell Miner HCM數據管理軟件來管理。IN Cell Miner 以經過驗證的 EMC Documentum 軟件為基礎,可以方便地注釋、建檔、檢索、存儲高內涵圖像和數據。研究機構的所有使用者可以分享和比較數據,大限度地挖掘和實現這些數據的價值。快速制做精美的數據圖,用于工作展示、技術交流和文章發表。IN Cell Analyzer Compliance Manager合規管理軟件則符合FDA 21 CFR Part 11標準。
生命科學中的廣泛應用
高內涵技術初應用于**篩選,隨著技術的進步和發展,近年來在生命科學研究中得到了廣泛的應用,包括細胞信號通路,腫瘤學,神經生物學,**學,傳染病學,干細胞的研究等等。很多實驗用高內涵平臺來完成,比現有的方法更靈敏,通量更高,成本更低,結果更準確和可靠。
RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達,所以該技術已被廣泛用于探索基因功能,成為一種主要的生物學研究工具。很多文獻報道了使用高內涵平臺高通量分析細胞表型變化進行RNAi篩選找到靶基因,IN Cell用戶發表了將近30篇此類論文。
siRNA文庫篩選細胞周期相關基因,CCPM:Cell Cycle Phase Marker
斑馬魚作為模式生物用于遺傳學、發育生物學研究,也廣泛應用于**篩選,建立了很多人類重大**斑馬魚模型,如神經系統**、腫瘤血管生成、先天性心臟病。斑馬魚胚胎是透明的,無需固定就可以在顯微鏡下觀察,體積小可以培養在96或384孔板中,方便施加各種條件進行高通量篩選。IN Cell 2000大芯片CCD相機和2×物鏡結合使用時,可以對96孔板整孔成像,特別適合對斑馬魚胚胎的觀察,短時間內可以獲得大量活體斑馬魚胚胎圖像,IN Cell Investigator圖像分析軟件的Zebra Fish模塊可以對這些圖像進行自動分析。浙江大學X.Xu等的文章發表在J Neurosci Methods. 2011 Sep 15;200(2):229-36。
業內評價
從IN Cell Analyzer 1000到近推出的IN Cell Analyzer 6000,GE Healthcare不斷**,開發出高內涵分析的硬件、軟件、細胞學試劑服務平臺和生物信息學整合工具,為客戶帶來新的技術體驗。
都柏林大學圣三一學院高內涵研究中心的主管Anthony Davies認為:“高內涵成像技術已成為不可缺少的工具,推進我們在細胞水平了解人體是如何工作的。與如今正在使用的傳統分析技術相比,這些新的研究平臺有能力產生數百倍更具科學價值的信息。”
IN Cell平臺在國內也有不少擁躉。在傳統的藥篩應用領域,醫學科學院**研究所、中科院上海**所,**醫學科學院毒物**研究所都在使用IN Cell平臺進行**篩選;而在基礎研究領域,中科院生物物理研究所,醫科院藥生所、生工所等也都在使用IN Cell平臺。