DNA探針介紹

DNA探針是以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板，人工合成的帶有放射性或生物素標(biāo)記的單鏈DNA片段，可用來快速檢測病原體。DNA探針將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標(biāo)記后制成的探針。可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，經(jīng)放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。
DNA探針是常用的核酸探針，指長度在幾百堿基對(duì)以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現(xiàn)已獲得DNA探針數(shù)量很多，有**、病毒、原蟲、**、動(dòng)物和人類細(xì)胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列，或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的，如**的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。以**為例，目前分子雜交技術(shù)用于**的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要準(zhǔn)確的多，是**分類學(xué)的一個(gè)發(fā)展方向。加之分子雜交技術(shù)的高敏感性，分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。**的基因組大小約5×106bp，約含3000個(gè)基因。各種**之間絕大部分DNA是相同的，要獲得某**特異的核酸探針，通常要采取建立**基因組DNA文庫的辦法，即將**DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然后用多種其它菌種的DNA作探針來篩選，產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除，后剩下的不與任何其它**雜交的克隆則可能含有該**特異性DNA片段。將此重組質(zhì)粒標(biāo)記后作探針進(jìn)一步鑒定，亦可經(jīng)DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針，常常是比較繁瑣的。探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法，所不同的是所建DNA文庫為可表達(dá)性，克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原，然后用來源**的多克隆抗血清篩選陽性克隆，所得到多個(gè)陽性克隆再經(jīng)其它**的抗血清篩選，后只與本**抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此**的特異性基因片段，它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。

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